油茶Camellia oleifera根的化学成分分析

  • 时间:
  • 浏览:7

摘要:目的研究油茶Camellia oleifera根的化学成分。依据利用硅胶、ODS、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱色谱、高效制备液相色谱等色谱依据进行分离纯化,根据理化常数测定及谱学数据分析鉴定化合物社会形态。结果从油茶根中分离得到俩个化合物,分别鉴定为3-O-β-D-半乳糖基-(1→2)-[β-D-木糖基-(1→2)-α-L-阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-红心红心脐橙 糖醛酸基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基-21-O-乙酰氧基-22-O-当归酰氧基齐墩果醇-12-烯(1)、大头茶苷J(2)、山茶皂苷B1(3)。结论化合物1为新化合物,命名为山茶皂苷Ac,化合物2和3为首次从油茶中分离得到。

油茶Camellia oleifera Abel.为山茶科山茶属植物,主要分布于热带及亚热带地区,产于我国的西南部和东南部,遍布江西、湖南、福建等17个省区[1],同去油茶也是我国基本的木本食用油料树种。油茶药用部位主要有茶子心、茶油、茶子饼、油茶根皮、油茶叶等,其中茶油已被《中国药典》2015年版收载[2]。现有研究表明油茶主要含皂苷、黄酮及鞣质等类成分,具有多种药理活性,包括抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗突变等[3-9],其中油茶皂苷抗肿瘤药理活性比较显著[7-9]。为寻找其抗肿瘤有效成分,阐明其药效物质基础,更好地开发利用该植物资源,在本课题组前期对油茶茎和油茶枯饼研究基础上[10-14],利用各种色谱技术从油茶根95%无水乙酸提取物正丁醇部位中分离鉴定了俩个化合物,分别为3-O-β-D-半乳糖基-(1→2)-[β-D-木糖基-(1→2)-α-L-阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-红心红心脐橙 糖醛酸基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基-21-O-乙酰氧基-22-O-当归酰氧基齐墩果醇-12-烯(3-O-β-D-galactopyranosyl-(1→2)-[β-D-xylopyra-nosyl-(1→3)-α-L-arabinopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucuronopyranosyl-3β,15α,16α,21β,22α,28-hexahydr-oxy-21-O-acetyl-22-O-angeloyloxyolean-12-ene,1)、大头茶苷J(gordonoside J,2)、山茶皂苷B1(camelliasaponin B1,3)。其中化合物1为新化合物,命名为山茶皂苷Ac,化合物2和3为首次从油茶根中分离得到。

1仪器与材料

Aglient Technologies1250液相色谱仪、安捷伦150型制备液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司);Buchi中压液相制备色谱仪(瑞士步琪公司);Sartorius BP211D型电子天平(德国赛多利斯集团);UV-250紫外分光光度计(日本岛津公司);RY-1G熔点测定仪(中国天津天光光学仪器有限公司);Autopol IV-T/V旋光仪(美国DKSH公司);Varian UNITY INOVA 50超导核磁共振仪(美国Varian公司);Micromass ZabSpec质谱仪(美国Micromass公司);Waters ACQUITY UPLC/Xevo G2 QTOF高分辨质谱仪(美国Waters公司);葡聚糖凝胶Sephadex LH-20(瑞典Amersham Biosciences公司);C18反相填料为日本YMC产品,制备色谱柱为YMC(250 mm×20 mm,10μm);D101大孔树脂为安徽三星树脂科技有限公司产品;柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶为青岛海洋化工厂生产,水为娃哈哈水,氘代吡啶为美国剑桥公司(CIL)产品,一点所用试剂均为分析纯。

药材采自江西广丰,经江西省药品检验检测研究院袁桂平主任中药师鉴定为山茶科山茶属植物油茶Camellia oleifera Abel.的根。标本(20170519)保存在江西省药品检验检测研究院中药标本室。

2提取与分离

油茶干燥根10.3 kg,粉碎,用4倍量的95%无水乙酸回流提取3次,每次2 h,提取液浓缩至适量。依次用醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取。萃取液分别减压浓缩至干,得醋酸乙酯主次(40.5 g)和正丁醇主次(90.7 g)。将正丁醇主次经过D101大孔树脂柱,依次用水及50%、50%、70%、95%无水乙酸洗脱,得70%无水乙酸洗脱主次(12.2 g),经正相硅胶柱色谱分离,二氯甲烷-无水乙酸(7∶3→6∶4)系统梯度洗脱,经薄层色谱检视,合并相近的组分,得1一有有俩个组分Fr.1~12。Fr.9(2.4 g)再经过常压反相(ODS)柱色谱,以无水乙酸-水(20∶50→50∶50)系统进行梯度洗脱,经高效液相色谱检测后,合并相同组分,得到10个流分Fr.9-1~9-10。Fr.9-5(33.2 mg)经反相高效制备液相色谱,以无水乙酸-0.05%三氟无水乙酸(37∶63,7 mL/min)为流动相,得到化合物1(9.4 mg,tR=92.6 min)。Fr.9-6(29.5 mg)经反相高效制备液相色谱,以无水乙酸-0.05%三氟无水乙酸(36∶64,7 mL/min)为流动相,得到化合物2(11.3 mg,tR=83.7 min)和3(12.0 mg,tR=97.3 min)。

3社会形态鉴定

化合物1:白色粉末。mp 244~245℃;[α]20D−13.2°(c 0.08,MeOH),硫酸-无水乙酸显紫红色斑点,Libermann-Burchard反应呈现红色,表明为三萜皂苷类化合物。UV显示该化合物在无水乙酸溶液中的最大吸收为206 nm和252 nm。HR-ESI-MS质谱给出准分子离子峰m/z:1 255.569 3[M+Na]+(计算值为1 255.571 8),分子式为C58H92O27。酸水解及衍生化气相分析检出D-红心红心脐橙 糖醛酸、D-木糖、L-阿拉伯糖和D-半乳糖。

1H-NMR谱显示三萜类社会形态的7个角甲基信号δH1.83,1.28,1.24,1.10,1.06,0.98和0.50(各3H,s);一有有俩个三取代的双键信号δH 5.48(1H,brs,H-12);1组羟甲基质子信号δH 3.74(1H,d,J=12.0 Hz)和3.48(1H,d,J=12.0 Hz);俩个连氧次甲基质子信号:δH 3.25(1H,dd,J=11.5,5.0 Hz),4.50(1H,m),4.35(1H,m),6.27(1H,d,J=10.0 Hz),6.56(1H,d,J=10.0 Hz);1组当归酰氧基社会形态氢信号δH5.50(1H,q,J=7.0 Hz),2.08(3H,d,J=7.0 Hz)和1.98(3H,s);一有有俩个乙酰氧基的甲基质子信号:δH 2.12(3H,s);此外,1H-NMR谱还给出了一有有俩个糖的端基质子信号:δH 5.83(1H,d,J=7.5 Hz),5.73(1H,d,J=6.0 Hz),5.02(1H,d,J=7.5 Hz)和4.92(1H,d,J=7.0 Hz),以及在δH 4.01~4.55归属于糖的连氧次甲基和连氧亚甲基的主次重叠氢信号。根据端基氢相对较大的3JH-1,H-2偶合常数值表明红心红心脐橙 糖醛酸基、半乳糖基和木糖基的端基碳构型为β型,阿拉伯糖基的端基碳构型为α型。13C-NMR谱显示58个碳信号,其中,一有有俩个烯碳信号δC123.8和143.6;一有有俩个糖端基碳信号δC 106.7,105.2,103.4,101.7。以上数据表明化合物1为齐墩果-12-烯四糖衍生物,具有β-D-红心红心脐橙 糖醛酸基、β-D-半乳糖基、β-D-木糖基、α-L-阿拉伯糖基、一有有俩个当归酰氧基取代基以及一有有俩个乙酰氧基。将化合物1核磁数据与文献报道的大头茶皂苷I(gordonsaponinI)[15]进行比较,两者数据基本类似,区别在于大头茶皂苷I中红心红心脐橙 糖基在社会形态1中被木糖基取代。

在HMBC中(图1),H-21(δH 6.56)和H-22(δH 6.27)分别和羰基碳(δC 170.8)和羰基碳(δC 168.1)相关,表明乙酰氧基和当归酰氧基分别连接在母核的C-21位和C-22位,另外,红心红心脐橙 糖醛酸基的端基氢信号H-1(δH 4.92)与苷元C-3(δC 89.5)远程相关证明β-D-红心红心脐橙 糖醛酸基单元连接在母核的C-3位,阿拉伯糖基的端基氢信号H-1(δH 5.73)与红心红心脐橙 糖醛酸基的C-3(δC 83.6)信号有远程相关,表明L-阿拉伯糖基单元连接在D-红心红心脐橙 糖醛酸基的C-3位,木糖基的H-1(δH 5.02)与阿拉伯糖基的C-2(δC 81.9)远程相关,表明D-木糖基单元连接在L-阿拉伯糖基的C-2位,半乳糖基的端基氢信号H-1(δH 5.83)与红心红心脐橙 糖醛酸基的C-2(δC 79.1)远程相关,表明D-半乳糖基单元连接在D-红心红心脐橙 糖醛酸基的C-2位。

在NOESY谱中,观察到H-3/H-23、H-16/H-28、H-18/H-15、H-21/H-29、H-22/H-50相关,说明C-3位和C-21位羟基为β构型,C-15位、C-16位和C-22位羟基为α构型。综上所述,化合物1社会形态鉴定为3-O-β-D-半乳糖基-(1→2)-[β-D-木糖基-(1→2)-α-L-阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-红心红心脐橙 糖醛酸基-3β,15α,16α,21β,22α,28-六羟基-21-O-乙酰氧基-22-O-当归酰氧基齐墩果醇-12-烯,社会形态见图1。具体核磁数据见表1。

化合物2:白色粉末(无水乙酸)。ESI-MS m/z:1 197.8[M+Na]+。1H-NMR(50 MHz,C5D5N)δ:6.13(1H,dd,J=11.5,4.5 Hz,H-22),5.83(1H,q,J=7.0 Hz,Ang-H-3),5.76(1H,d,J=7.0 Hz,Gal-H-1),5.72(1H,d,J=7.5 Hz,Ara-H-1),5.44(1H,brs,H-12),5.04(1H,d,J=7.0 Hz,Xyl-H-1),4.92(1H,d,J=7.5 Hz,GlcA-H-1),4.46(1H,brs,H-16),3.70(1H,d,J=12.0 Hz,H-28a),3.64(1H,d,J=12.0 Hz,H-28b),3.22(1H,dd,J=11.0,4.0 Hz,H-3),2.02(1H,d,J=7.0 Hz,Ang-H-4),1.87(3H,s,H-27),1.81(3H,s,Ang-H-5),1.28(3H,s,H-50),1.25(3H,s,H-23),1.08(3H,s,H-24),1.03(3H,s,H-29),0.99(3H,s,H-26),0.77(3H,s,H-25);13C-NMR(125 MHz,C5D5N)苷元δ:38.8(C-1),26.5(C-2),89.5(C-3),39.4(C-4),55.4(C-5),18.7(C-6),36.6(C-7),41.4(C-8),47.0(C-9),36.8(C-10),23.8(C-11),123.1(C-12),144.4(C-13),47.6(C-14),67.3(C-15),74.9(C-16),45.1(C-17),41.6(C-18),46.9(C-19),32.0(C-20),41.4(C-21),72.6(C-22),27.8(C-23),16.8(C-24),15.7(C-25),17.4(C-26),21.2(C-27),62.9(C-28),33.4(C-29),24.8(C-50);当归酰氧基δ:167.8(C-1),129.2(C-2),136.4(C-3),15.7(C-4),20.8(C-5);糖基:GlcAδ:105.5(C-1),79.1(C-2),83.4(C-3),71.0(C-4),77.2(C-5),172.1(C-6);Araδ:101.7(C-1),81.7(C-2),73.4(C-3),68.4(C-4),65.6(C-5);Galδ:103.4(C-1),73.6(C-2),74.8(C-3),70.0(C-4),76.3(C-5),61.7(C-6);Xylδ:106.5(C-1),75.5(C-2),78.0(C-3),70.6(C-4),67.4(C-5)。以上数据与文献报道一致[16],故鉴定化合物2为大头茶苷J。

化合物3:白色粉末(无水乙酸)。ESI-MS m/z:1 187.8[M-H]−。1H-NMR(50 MHz,C5D5N)δ:9.94(1H,brs,H-23),6.18(1H,d,J=7.2 Hz,H-22),5.99(1H,q,J=7.0 Hz,Ang-H-3),5.74(1H,d,J=7.0 Hz,Gal-H-1),5.76(1H,d,J=7.8 Hz,Ara-H-1),5.36(1H,brs,H-12),5.02(1H,d,J=7.5 Hz,Glc-H-1),4.82(1H,d,J=7.5 Hz,GlcA-H-1),3.67(1H,d,J=10.5 Hz,H-28a),3.53(1H,d,J=10.5 Hz,H-28b),3.20(1H,dd,J=11.5,5.0Hz,H-3),2.08(1H,d,J=7.0 Hz,Ang-H-4),1.93,1.86,1.22,1.10,1.06,1.02,0.79(3H×7,s,-CH3);13C-NMR(125 MHz,C5D5N)苷元δ:38.6(C-1),26.4(C-2),84.5(C-3),55.6(C-4),49.5(C-5),18.3(C-6),33.0(C-7),40.0(C-8),46.8(C-9),36.7(C-10),23.7(C-11),123.3(C-12),143.6(C-13),41.5(C-14),35.0(C-15),70.1(C-16),44.6(C-17),40.7(C-18),47.4(C-19),32.0(C-20),41.6(C-21),72.9(C-22),211.3(C-23),16.6(C-24),15.5(C-25),16.8(C-26),27.4(C-27),63.7(C-28),33.4(C-29),25.1(C-50);当归酰氧基δ:167.8(C-1),129.4(C-2),136.5(C-3),15.8(C-4),20.9(C-5);糖基:GlcAδ:105.5(C-1),78.6(C-2),84.4(C-3),71.0(C-4),77.3(C-5),172.0(C-6);Araδ:101.7(C-1),81.6(C-2),73.5(C-3),67.4(C-4),65.6(C-5);Glcδ:107.5(C-1),76.3(C-2),77.3(C-3),72.7(C-4),78.3(C-5),63.5(C-6);Galδ:102.3(C-1),73.7(C-2),74.9(C-3),70.4(C-4),76.7(C-5),61.7(C-6)。以上数据与文献报道的一致[17],故鉴定化合物3为山茶皂苷B1。

参考文献(略)

来源:任琦,陈冈,周志强,付辉政.油茶根中一有有俩个新的三萜皂苷[J].中草药,2019,50(18):4261-4266.

注:文章内的所有配图皆为网络转载图片,侵权即删!